Los monómeros de hidrogel se difunden uniformemente a través de la muestra de tejido fijada mediante el kit de solución de hidrogel X-CLARITY™, luego se colocan en el sistema de polimerización X-CLARITY™. Los monómeros se polimerizan en un ambiente anaeróbico, uniendo las biomoléculas con una red de hidrogel estable, protegiendo la información molecular y la integridad estructural. X-CLARITY™ Tissue Clearing System II utiliza la solución electroforética de clarificación de tejidos para clarificar el híbrido tejido-hidrogel. Los lípidos son extraidos activamente mediante electroforesis, o pasivamente proporcionando un tejido estable, tranparente que es químicamente compatible con el fenotipado molecular.
Utilizando el kit de tinción de anticuerpos DeepLabel™, las muestras transpaentes se tiñen con anticuerpos que penetran más fácilmente en los tejidos clarificados. Optimizado para muestras de tejido clarificado, DeepLabel™ kit puede utilizarse con tejidos clarificados con otros métodos de clarificación como CLARITY pasivo o activo, iDISCO, 3DISCO, uDISCO, Visikol o CUBIC.
Antes de la obtención de imágenes, el híbrido tejido-hidrogel se incuba en una solución de montaje para la homogeneización del índice de refracción (RI) del tejido con la solución. Esto implica una reducción de la dispersión de la luz para la obtención de imágenes a más profundidad, aumentando la transparencia óptica y la calidad de la imagen.
“[The X-CLARITY] has actually been fundamental to the Data Brain Project because without being able to clear tissues of the lipids, we wouldn’t be able to image deep into brains. So we wouldn’t be able to extract that structural information that is so important to understand the function of mammalian brains. It’s been a huge advantage and a great leap forward in imaging.”
“Thanks to X-CLARITY, we now have access to the threedimensions of the whole heart organ.”
